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LOVO+luc人結直腸癌細胞熒光素酶標記傳代/復蘇技巧
更新時間:2024-07-12 點擊量:239

LOVO+luc人結直腸癌細胞熒光素酶標記

,LOVO luc

貨號:YJ-0079a(STR(lovo鑒定))

價格: 3200.0

規格: 1x106

細胞介紹

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1 來源:結直腸腺癌

2 形態:上皮細胞樣,貼壁生長

3 含量:>1x106細胞數

4 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩定轉染Luc的細胞,隨細胞傳代次數的增加,其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。        

建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養基維持培養,若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養基繼續篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養基培養,至細胞密度約80%,可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養基正常培養。

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備:1640 基礎培養基(推薦:YJ-0002),優質胎牛血清10 %P/S 1 %

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二.細胞處理:

1 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

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