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人瘧疾酶聯免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用

目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關

液體樣本中瘧疾。

實驗原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中人瘧疾。用純化的瘧疾抗體包

被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中瘧疾相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后

再與  HRP標記的瘧疾抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物

TMB顯色。TMB在    HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用

酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），與   CUTOFF值相比較，從而判定標本中瘧疾

的存在與否。

操作步驟：

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2孔、陽性對照  2孔、空白對照   1

孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照   50μl。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液  40μl，然后再加待測樣品  10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不

觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4.配液：將 30（48T的  20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至  600ml后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此

重復 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘

10.終止：每孔加終止液    50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止

液后 15分鐘以內進行。

結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD值<臨界值（CUT    OFF）者為人瘧疾陰性

陽性判定：樣品 OD值≥臨界值（CUT    OFF）者為人瘧疾陽性

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為  630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸，使用時必須

注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月